Expression profile of endothelin receptors (ETA and ETB) and microRNAs-155 and -199 in the corpus cavernosum of rats submitted to chronic alcoholism and diabetes mellitus

Recent evidence shows that chronic ethanol consumption increases endothelin (ET)-1 induced sustained contraction of trabecular smooth muscle cells of the corpora cavernosa in corpus cavernosum of rats by a mechanism that involves increased expression of ETA and ETB receptors. Our goal was to evaluate the effects of alcohol and diabetes and their relationship to miRNA-155, miRNA-199 and endothelin receptors in the corpus cavernosum and blood of rats submitted to the experimental model of diabetes mellitus and chronic alcoholism. Forty-eight male Wistar rats were divided into four groups: control (C), alcoholic (A), diabetic (D), and alcoholic-diabetic (AD). Samples of the corpus cavernosum were prepared to study the protein expression of endothelin receptors by immunohistochemistry and expression of miRNAs-155 and -199 in serum and the cavernous tissue. Immunostaining for endothelin receptors was markedly higher in the A, D, and AD groups than in the C group. Moreover, a significant hypoexpression of the miRNA-199 in the corpus cavernosum tissue from the AD group was observed, compared to the C group. When analyzing the microRNA profile in blood, a significant hypoexpression of miRNA-155 in the AD group was observed compared to the C group. The miRNA-199 analysis demonstrated significant hypoexpression in D and AD groups compared to the C group. Our findings in corpus cavernosum showed downregulated miRNA-155 and miRNA-199 levels associated with upregulated protein expression and unaltered mRNA expression of ET receptors suggesting decreased ET receptor turnover, which can contribute to erectile dysfunction in diabetic rats exposed to high alcohol levels.

Immunohistochemistry analysis of proteins related with apoptosis as prognostic factor in epidermoid carcinomaof penis / Análisis inmunohistoquímico de proteínas relacionadas con la apoptosis como factor pronóstico en el carcinoma epidermoide de pene

The aim was to analyze the protein expression of apoptotic genes caspase-3, caspase-8 and bcl-2 with the immunohistochemistry technique, correlating with tumor grade (I, II and III) and with the patient survival in order to understand the basic mechanism of tumoral transformation. The immunohistochemistry reactions on 50 samples of squamous cell carcinoma were carried out with the avidin-biotin immunoperoxidase method and antigen recovery. The analyses were made using the graduation method "in crosses" (0 to 4 crosses - no stain to more than 75 percent of positives cells) and in categories (low, intermediate, high) of the cytoplasm immunoreactivity of the epidermoid penile carcinoma cells. It was observed a statistically significant difference when the expression of caspase-3 were compared with the grades I and II of the tumor (p=0.0010) and when comparing the patient survival with the grades I and II of the tumor (p=0.0212). The protein bcl-2 was more expressed than caspase-3 and caspase-8 proteins, suggesting that the apoptotic rate in this carcinoma is low. The higher expression of the anti-apoptotic protein bcl-2 suggests a higher preservation of the tumoral cells...

El objetivo fue analizar la expresión de las proteínas de genes de apoptosis caspasa-3, caspasa-8 y Bcl-2-con la técnica de inmunohistoquímica, en correlación con el grado tumoral (I, II y III) y la supervivencia del paciente con el fin de comprender el mecanismo básico de la transformación tumoral. Se analizaron las reacciones inmunohistoquímicas sobre 50 muestras de carcinoma de células escamosas mediante el método de la inmunoperoxidasa avidina-biotina y la recuperación de antígeno. Los análisis se realizaron utilizando el método de graduación "en cruces" (0 a 4 cruces - no tinción a más del 75 por ciento de las células positivas) y en categorías (baja, media, alta) de la inmunorreactividad citoplasmática de las células de carcinoma epidermoide de pene. Se observó una diferencia estadísticamente significativa cuando la expresión de la caspasa-3 se comparó con los grados I y II del tumor (p = 0,0010) y cuando se comparan la supervivencia de los pacientes con los grados I y II del tumor (p = 0,0212). La proteína bcl-2 se expresa más que la caspasa-3 y caspasa-8, lo que sugiere que la tasa de apoptosis en este carcinoma es baja. La mayor expresión de la proteína anti-apoptótica bcl-2 sugiere una mayor preservación de las células tumorales...

Avaliação urodinâmica de pacientes chagásicos

In this article we have studied the pathophysiology of the lower urinary tract of patients with chronic Chagas' disease: Control Group (A) with 21 normal individuals; Group (B) 16 patients with positive serum for T. cruzi; Group (C) 16 patients with Chagas' cardiophaty and Group (D) 21 patients with Chagas' megacolon or megaesophagus. Urodynamics did not show difference (p > 0,05) among all groups as long as the following parameters are concerned: cystometric bladder capacity, voiding pressure, and urinary flow. On the contrary, a significant difference (p 0,05) was observed between Groups A and D in the following parameters: abdominal pressure, detrussor pressure, urethral pressure and time of voiding. These findings suggest that Chagas' disease promotes changes of the lower urinary tract in patients that bears digestive dysfunction.

No presente trabalho estudou-se a fisiologia urinária de pacientes com Doença de Chagas nas suas diversas formas. Grupo A (controle) com 21 indivíduos normais; Gupo B: 16 pacientes com sorologia positiva; Grupo C: com 16 pacientes com cardiopatia chagásica e Grupo D: 21 pacientes com esofagopatia e/ou megacolon chagásicos. Os resultados mostraram que não houve diferenças significantes (p > 0,05) entre os 4 grupos estudados para os parâmetros: capacidade cistométrica, pressão de micção e fluxo urinário. Entretanto, houve diferenças significantes (p 0,05) para os parâmetros: pressão abdominal, pressão do detrusor, pressão uretral e tempo de micção na análise comparativa entre o grupo D e o controle A. Esses achados sugerem que a Doença de Chagas, em sua forma digestiva, também pode comprometer o trato urinário baixo, alterando sua fisiologia.

Avaliação dos gânglios regionais no carcinoma epidermóide do pênis (cep) através de um índice de risco

The aim of this study was to investigate the predictive value of a risk index (RI) based on tumor pT stage and grade on the prognosis for inguinal lymphactic metastasis. We included 53 patients bearing schamous cell carcinoma of the penis (SCCP) treated by penectomy at the Hospital das Clínicas da FMRP-USP from 1978 to 1995. Age range varied from 32 to 97 years. Tumor grading was determined according to Broders method and staging by 1999 TNM system. RI was calculated by the sum of pT stage and grade (RI = pT+G). Bilateral inguinal lymphdenectomy was carried out within 6 weeks the penectomy in 14 patients cN+ at the presentation. The remaining 36 cases were kept under surveillance. In 9 of these patients required a delayed regional lymphadenectomy due to nodal relapse (median follow-up: 9 months). Proportions of pN0 patients according to RI were: 92% - 2, 80% - 3 and 0% - 6. The proportion of pN+ patients with a pooled RI of 4, 5 and 6 was significantly higher than that seen in pooled cases with lower RI (p = 0,004). From 36 patients initially cN0, 27 were RI 2 or 3 ( 5 of them progressed later on to pN+ , 19%) and 9 were RI ³ 4 (3 of them had progression to lymphatic spread, 33%). But, the difference observed in cN0 patients was not significant (p = 0,3). In conclusion, patients with RI ³ 4 were at higher risk of nodal spread when the overall sample was at stake, but this cutoff level for RI had no predictive value for the patients that were initially cN0.

O objetivo desse estudo foi investigar a validade de um índice de risco (IR) no prognóstico de metástases ganglionares no carcinoma epidermóide do pênis (CEP). Foram analisados 53 pacientes com CEP atendidos no Hospital das Clínicas da FMRP-USP, de janeiro de 1978 a dezembro de 1995. A idade variou de 32 a 97 anos. Os tumores foram graduados de acordo com a classificação de Broders e estadiados retrospectivamente (TNM 1999). O IR foi determinado pela soma de TeG (IR = T+G). A linfadenectomia inguinal bilateral (LD) foi indicada naqueles que apresentaram gânglios suspeitos após a antibioticoterapia ou que vieram apresentar alterações durante o período de observação. Faleceram 17 pacientes; A LD foi realizada em 14 pacientes e os 39 restantes permaneceram em observação clínica, sendo que em 8 deles foi feito LD após tempo mediano de 9 meses. Dos pacientes com índice de risco 2 e 3 92% e 80% respectivamente não apresentavam metastase ganglionar, ao passo que a totalidade daqueles com IR=6 tinha gânglios comprometidos. A associação dos grupos 2 e 3, comparada ao conjunto 4, 5 e 6, mostrou percentual maior de comprometimento nestes últimos (p = 0,0046). Dos 36 pacientes inicialmente No, 27 apresentavam IR 2 ou 3, dos quais 5 evoluíram para N+ (19%); os 9 restantes eram IR > 4 e 3 também evoluíram para N+ (33%). Apesar da diferença, não houve significância estatística entre eles (p = 0,3837). Embora tenha ocorrido maior comprometimento naqueles com IR > 4, o índice de risco não foi capaz de identificar previamente pacientes que evoluíram para N+.

Clororpromazina e função mitocondrial na isquemia-reperfusão renal

The purpose of this study was to evaluate the function of mitochondria obtained from kidneys submmited to 48 hours of cold ischemia followed by 1 hour of reperfusion, with and without the use of chlorpromazine. Sixteen adult mongrel dogs were submitted to unilateral nephrectomy. In 13 animals the kidney was then perfused with Euro-Collins solution and preserved during 48-hours in cold solution. After that time auto-transplantation was performed. Reperfusion time was 1 hour. After that, the transplanted kidney was taken out and samples were obtained for mitochondrial evaluation. The animals were divided into 3 groups: group N - control without ischemia (3 animals); group I - hypothermia (6 animals); group II - hypothermia + IV injection of 2 mg/Kg of chlorpromazine 15 minutes before nephrectomy. The results of mitochondrial phosphorilation and swelling showed no statistical differences. However, group II animals showed higher values during the reversion phase of the swelling. Chlorpromazine action on mitochondrial function has been previously described, providing better mitochondria recovering from ischemic lesion. The results obtained in this study may be related to the short reperfusion time, or we can argue that chlorpromazine has no protection after prolonged ischemic time, or chlorpromazine action may be masqueraded by hypothermia.

Introdução e objetivo - em transplante renal com doador cadáver, a função do enxerto depende da manutenção da integridade celular e subcelular, principalmente mitocondrial. Neste estudo o objetivo foi analisar a função mitocondrial do rins submetidos a período prolongado de isquemia fria, seguido de reperfusão por uma hora, empregando-se, ou não, a clorpromazina previamente à isquemia. Métodos - utilizando autotransplante renal em cães, subdivididos em dois grupos, foram extraidas mitocôndrias de rins submetidos à isquemia fria de 48 horas, seguida de 1 hora de reperfusão pós-transplante. Um grupo recebeu clorpromazina antes da nefrectomia. A análise da fosforilação oxidativa e do intumescimento osmótico ("swelling") mitocôndrial foi comparada com dados obtidos de rins normais, sem isquemia. Resultados - Os dados obtidos para o estado III e IV da respiração não mostraram diferença significativa entre os grupos experimentais. A primeira fase do "swelling" ocorreu em tempo semelhante em todos os grupos experimentais. Durante a reversão, os grupos I e II se comportaram de maneira estatisticamente semelhante, com frações de reversão de 57%, e 68%, respectivamente, valores significativamente menores que os obtidos para o grupo normal (99%) (grupo I: p = 0,0374 e grupo II: p = 0,0221). Discussão - é conhecida a ação protetora da clorpromazina na isquemia renal normotérmica. Entretanto, os dados aqui obtidos mostram que após 48 horas de isquemia fria, o grupo II (clorpromazina) comportou-se de maneira semelhante ao grupo I (hipotermia isolada) tanto no estudo da fosforilação oxidativa, quanto no "swelling", embora os valores apresentem tendência a serem maiores no grupo II. Isto pode ser devido a alguns fatores, como: 1) a clorpromazina possui efeito protetor mínimo quando o tempo de isquemia é prolongado; 2) seu efeito pode ser afetado ou sua ação protetora sobreposta àquela imposta pela hipotermia; 3) tempo de reperfusão curto para manifestação de seus efeitos.

Antígeno nuclear de proliferação celular (pcna) em carcinoma de células transicionais de bexiga

Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression was described as marker of the proliferative activity in urothelial tumors. We compared the PCNA immunostaining index with the outcome of patients with bladder cancer. We revised 90 patients, with age varying from 29 to 93 years (mean 71 yrs), being 77.8% men and 22.2% women; mean follow-up of 55 months (2-231 months). Fifty per cent of tumors were grade I; 32.2% grade II and 17.8% grade III. Primary tumor stage was: invasive (> >pT1=31.1% and superficial (pTA-1=68.9%). Eighty-seven tumors (96.6%) expressed PCNA (median 72.5%, mean 60.1%). The mean PCNA index was not different (p = 0.39) in superficial or invasive tumors. The comparison of immunostaining mean values between G1/G2 (p = 0.087), /G1/G3 (p = 0.11) and G2//g3 (p = 0.66) was not statistically significant, as well among recurring and non-recurring tumors (p = 0.84) but PCNA expression correlated with survival rate (p = 0.003) and metastases free intervals (p = 0.01) but not with recurrent free intervals (p = 0.86). In conclusion, PCNA over expression correlated with survival and metastasis free intervals, but was not significant to differentiate invasive stages, agressive grades and recurring tumors.

O antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) foi descrito como marcador da atividade proliferativa. Correlacionamos a marcação do PCNA com a evolução dos pacientes com carcinoma de células transicionais de bexiga. Revisamos 90 pacientes do HC-FMRP-USP de 1980-2000; com idade variando de 29 a 93 anos e média de 71 anos; sendo 77,8% homens e 22,2% mulheres; seguimento médio de 55 meses (2-231 meses). Constatamos 50% de tumores grau I, (32,2%) grau II e 17,8% grau III; estadiados em pTA-60%, pT1-8,9% e >pT1 31,1%. Utilizamos o anticorpo primário Monoclonal Mouse Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) Clone PC10 (DAKO). Foram contadas 500 células (X400), e utilizado ponto de corte de 50%. A análise estatística foi realizada com o teste de Mann-Whitney. Kaplan-Meier e Logrank Oitenta e sete tumores (96,66%) expressaram PCNA (mediana 72.5%, média 60,16%). Observamos diferença não significativa (P=0,39) na imunomarcação do PCNA entre tumores pT2-4 e pTA-1. A comparação de medias entre G1 e G2 (P=0,087), G1 e G3 (P=0,11) e entre G2 e G3 (P=0,66) não mostraram significado estatístico,assim como entre tumores com recidiva e sem recidiva (P=0,84). Os indivíduos PCNA positivos não tiveram intervalo livre de doença significativamente diferente (P=0,86); entretanto foi significativa a diferença nas curvas de sobrevida (P=0,003) e nas curvas de intervalos livres de metástase (P=0,01). A expressão imunohistoquímica do PCNA não foi efetiva para diferenciar os tumores mais avançados e agressivos, assim como para predizer recidivas. Desta forma, apesar da correlação com o tempo livre de metástase e a sobrevida, não mostrou utilidade prática.

Expressão imunohistoquímica do mib-1 em carcinoma de células transicionais de bexiga

We investigate the immunoexpression of MIB-1 antigen on the outcome of the transitional carcinoma of the bladder. We revised 90 patients with a mean follow-up of 55 (2-231) months. Forty five (50%) tumors were grade I, 29 (32.2%), grade II and 16 (17.8%) grade III. The tumors were staged in pTa-1: 62 (68.9%) and pT2-4: 28 (31.1%). We considered positive the tumors with more than 10% imunostained cells. Sixty three patients (70%) expressed MIB-1, with significant difference (P 0,05) between invasive tumors (pT2-4) and non-invasive (pTA-1) and between pTA and pT1 tumors (P=0,01). There was also a significant association of MIB-1 immunostaining with tumor grade: G1 versus G2 (p 0,001) and G1 versus G3 (p 0,001). But such difference did not occur with G2 and G3 tumors ( p = 0,2). The relationship of MIB-1 expression with the size of the lesion was significant (p 0,02). The recurrence was not predicted by the MIB-1 labeling pattern (p=0,86), though, the MIB-1-positive patients had significant smaller metastasis free intervals (p = 0.04), and lower survival rates, both among superficial tumors (p=0.009) and in total sample (p = 0.0002).

A expressão do MIB-1 é um excelente marcador da atividade proliferativa e correlaciona-se com a agressividade biológica do carcinoma de células transicionais da bexiga.Correlacionamos a expressão do MIB-1 com a evolução dos pacientes. Revisamos 90 pacientes do HC-FMRP-USP entre 1980-2000, com idade entre 29 a 93 anos (média 71 anos);sendo 70 (77,8%) homens e 20 (22,2%) mulheres; e seguidos em média por 55 (2-231) meses. 45 (50%) tumores tinham grau I, 29 (32,2%) grau II e 16 (17,8%) grau III. Os tumores foram estadiados em pTA: 54 (60%), pT1: 8 (8,9%) e pT2-4: 28 (31,1%). Foi utilizado o anticorpo monoclonal anti-MIB-1 (Immunotech). Emprega-se o limite de 10% de núcleos corados como nível de corte para o MIB-1. Utilizamos para análise estatística os testes Mann-Whitney, Kaplan-Meier, e log rank, e nível de significância 5%. Expressaram MIB-1, 63 pacientes (70%) variando de 0 a 80%(mediana 5%, média 22,8%), com diferença significativa (P 0,05) entre tumores invasivos (pT2-4) e não invasivos (pT A-1) e entre os estádios pT A e pT1 (P=0,01). Houve associação com o grau dos tumores: significativa entre G1 e G2 (P 0,001) e G1 e G3 (P 0,001), e sem significância entre G2 e G3 (P=0,2). A relação do MIB-1 com o tamanho da lesão foi significante (P 0,02). As recidivas não foram preditas pelo índice MIB-1 (P=0,86), entretanto em pacientes MIB-1 positivos foi significantemente menor o intervalo livre de metástase (P=0.04), e a sobrevida entre tumores não invasivos (P=0.009) e na população total (P=0.0002), Há correlação entre a alta expressão do MIB-1 e os estádios invasivos, os graus avançados e os tumores maiores, contudo, não há diferença em tumores recidivados. O índice de positividade do MIB-1 não distinguiu os pacientes com menor tempo livre da doença, foi, contudo, significante para apontar aqueles com menor sobrevida e tempo livre de metástase.

Antígeno nuclear de proliferação celular em tumores de adrenal

Fez-se um estudo imunohistoquímico do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) em 26 adenomas e 24 carcinomas de adrenal através da técnica da avidina-biotina-peroxidase. O índice de marcação (IP) do PCNA, definido com o número de células marcadas/1000 contadas, foi em média de 77,4± 66,1 (mediana - 63,5) para os adenomas enquanto que para os carcinomas foi 215,8± 56,0 (mediana - 217,5) (p 0,0001). Estabelecendo-se o IP de 100 o marcador (para a discriminação de carcinomas dos adenomas) o marcador exibiu sensibilidade, especificidade e valor preditivo positivo seguintes, respectivamente: 100%, 69% e 75%.